Pangaea qPCR 장비를 사용하여 KASP 유전자형 검사를 5분 만에 수행하는 방법을 알아보세요.

2단계:

PCR 증폭은 qPCR 장비를 통해 수행됩니다. 첫 번째 PCR 증폭 단계에서, 대립유전자 특이적 프라이머(3' 말단은 쌍을 이룰 수 있음)는 특정 대립유전자 주형을 식별하여 대립유전자 인식을 완료합니다. 역방향 범용 프라이머 또한 결합하여 전체 PCR 과정을 완료합니다. 이 단계에서 형광 표지 프로브는 여전히 상보적인 소광 프로브에 결합되어 있어 형광 신호가 발생하지 않습니다. 두 번째 PCR 증폭 단계부터 범용 태그 서열을 가진 주형이 생성물에 나타납니다. 이 단계를 통해 SNP에 해당하는 PCR 생성물에 범용 태그 서열이 도입됩니다. 이후, 형광 프로브가 태그에 상보적인 DNA 사슬에 결합하여 PCR 생성물에 추가되므로, 더 이상 상보적인 소광 프로브와 결합하지 않아 형광 신호가 발생합니다.

터치다운 PCR 프로그램이 설정되어 있기 때문에 프로브와 프라이머의 개별 결합이 보장됩니다. 어닐링 온도가 높으면 프라이머는 높은 Tm 값 때문에 먼저 주형에 특이적으로 결합한 다음 Taq 효소의 작용으로 증폭되어 프로브 증폭을 위한 원래 주형의 양을 증가시킵니다. 어닐링 온도가 낮아지면 프로브가 주형에 결합하기 시작하여 형광 신호를 생성합니다.

3단계:

Pangu qPCR 검사를 실행한 후, SNP 분석 메뉴에서 KASP 데이터를 확인하십시오.