नाइका® ड्रॉपलेट चिप डिजिटल पीसीआर प्रणाली, ड्रेवेट सिंड्रोम एसएनसीएन1ए नॉनसेंस म्यूटेशन मॉडल में आर613एक्स ट्रांसक्रिप्शन स्तरों का सटीक मापन करती है।

2024-04-28

ड्रावेट सिंड्रोम (ड्रावेट) एक गंभीर जन्मजात विकासात्मक आनुवंशिक मिर्गी है जो SCN1A जीन में नए उत्परिवर्तनों के कारण होती है। लगभग 20% रोगियों में SCN1A नॉनसेंस उत्परिवर्तन पाए जाते हैं, और कई रोगियों में SCN1A R613X उत्परिवर्तन की पहचान की गई है। इज़राइल के तेल अवीव विश्वविद्यालय के सगोल स्कूल ऑफ न्यूरोसाइंस, मानव आणविक आनुवंशिकी और जैव रसायन विभाग और गोल्डश्लेगर आई इंस्टीट्यूट के शोधकर्ताओं ने बायोआरएक्सिव प्लेटफॉर्म पर "ड्रावेट सिंड्रोम के लिए एक नए SCN1A नॉनसेंस मॉडल में गर्मी से प्रेरित दौरे, समय से पहले मृत्यु और अतिसक्रियता" शीर्षक से एक लेख प्रकाशित किया है।

लेखकों ने एक नॉनसेंस Scn1a उत्परिवर्तन युक्त ड्रेवेट माउस मॉडल का निर्माण किया, जिसमें विषमयुग्मजी Scn1a R613X उत्परिवर्तन ने स्वतःस्फूर्त दौरे, ताप-प्रेरित दौरे के प्रति संवेदनशीलता और असमय मृत्यु प्रदर्शित की, जो ड्रेवेट मिर्गी के मूल लक्षण को दोहराता है। इस अध्ययन में, लेखकों ने WT Scn1a और R613X mRNA के एलील-विशिष्ट मात्रा निर्धारण के लिए naica® ड्रॉपलेट चिप डिजिटल पीसीआर प्रणाली का उपयोग किया।

एप्लिकेशन की मुख्य विशेषताएं:

▶ नाइका® ड्रॉपलेट चिप डिजिटल पीसीआर सिस्टम ने ड्रेवेट माउस मॉडल में WT Scn1a और R613X mRNA एलील्स की मात्रा को सटीक रूप से निर्धारित किया।

▶ विषमयुग्मजी जानवरों में, नाइका® ड्रॉपलेट चिप डिजिटल पीसीआर सिस्टम ने स्थिर R613X ट्रांसक्रिप्ट स्तरों को वाइल्ड-टाइप के 8.9±0.9% पर मापा, जो दर्शाता है कि उत्परिवर्ती एलील के ट्रांसक्रिप्ट कॉर्टिकल ऊतक में नॉनसेंस-मध्यस्थ आरएनए क्षय (एनएमडी) से गुजरते हैं।

कॉर्टेक्स में R613X ट्रांसक्रिप्ट के स्तर का मात्रात्मक आकलन करने के लिए, WT Scn1a और R613X एलील का विशेष रूप से पता लगाने के लिए naica® ड्रॉपलेट ऐरे डिजिटल पीसीआर सिस्टम का उपयोग किया गया था।

परिणाम:

Naica® माइक्रोड्रॉपलेट चिप डिजिटल पीसीआर प्रणाली ने WT चूहों के कॉर्टिकल ऊतकों में R613X एलील का पता नहीं लगाया, जिससे विधि की विशिष्टता की पुष्टि होती है (चित्र A)। WT कॉर्टेक्स की तुलना में Scn1aWT/R613X ऊतकों में WT एलील का स्तर लगभग आधा था, जैसा कि विषमयुग्मजी जानवरों के लिए अपेक्षित था (चित्र B)। विषमयुग्मजी जानवरों में, स्थिर उत्परिवर्ती R613X प्रतिलेख 8.9±0.9% थे (चित्र C), जो अपेक्षित 50% स्तर से काफी कम है, यह दर्शाता है कि उत्परिवर्ती एलील के प्रतिलेख कॉर्टिकल ऊतकों में तीव्र नॉनसेंस-मध्यस्थता क्षय (NMD) से गुजरते हैं।

▲चित्र। Scn1aWT/R613X चूहों के कॉर्टेक्स में Scn1a mRNA की अभिव्यक्ति में कमी। A. WT चूहों के कॉर्टिकल ऊतक में R613X एलील के कोई भी प्रतिलेख नहीं पाए गए, जो इस एलील की विशिष्टता को दर्शाता है। B. Scn1aWT/R613X चूहों के कॉर्टिकल ऊतक में, WT Scn1a एलील, WT कॉर्टेक्स की तुलना में 48.8% था। C. R613X और WT एलील के अनुपात से पता चलता है कि Scn1aWT/R613X जानवरों में Scn1a R613X एलील का औसत स्थिर स्तर WT एलील का 8.9±0.9% था।

मूल लिंक इस प्रकार है: https://doi.org/10.1101/2023.02.01.526678

फ्रांस की स्टिला टेक्नोलॉजीज का नाइका® छह-चैनल डिजिटल पीसीआर सिस्टम क्रिस्टल ड्रॉपलेट चिप डिजिटल पीसीआर तकनीक पर आधारित है, जो ड्रॉपलेट निर्माण और प्रवर्धन को स्वचालित करता है। प्रत्येक सैंपल वेल 6 फ्लोरोसेंट चैनलों का पता लगा सकता है, ड्रॉपलेट्स की बुद्धिमानी से पहचान कर गुणवत्ता नियंत्रण कर सकता है और 3 घंटे के भीतर कम से कम 6 लक्षित जीनों की पूर्ण प्रतिलिपि संख्या सांद्रता प्राप्त कर सकता है।