पैंगिया qPCR उपकरण का उपयोग करके KASP जीनोटाइपिंग परीक्षण करने का तरीका पाँच मिनट में सीखें

चरण दो:

पीसीआर प्रवर्धन एक क्यूपीसीआर उपकरण के माध्यम से किया जाता है। पीसीआर प्रवर्धन के पहले चरण में, एलील-विशिष्ट प्राइमर (जिसका तीसरा सिरा युग्मित हो सकता है) विशिष्ट एलील टेम्पलेट की पहचान करता है और एलील की पहचान पूरी करता है। रिवर्स यूनिवर्सल प्राइमर भी जुड़कर पूरी पीसीआर प्रक्रिया को पूरा करता है। इस चरण में, फ्लोरोसेंट रूप से लेबल किया गया प्रोब अभी भी अपने पूरक क्वेंचिंग प्रोब से जुड़ा होता है और कोई फ्लोरोसेंट सिग्नल उत्पन्न नहीं होता है। पीसीआर प्रवर्धन के दूसरे चरण से, उत्पाद में एक यूनिवर्सल टैग अनुक्रम वाला टेम्पलेट दिखाई देता है। यह चरण एसएनपी के अनुरूप पीसीआर उत्पाद में यूनिवर्सल टैग अनुक्रम के समावेश को पूरा करता है। इसके बाद, फ्लोरोसेंट प्रोब टैग के पूरक डीएनए श्रृंखला से जुड़कर पीसीआर उत्पाद में जुड़ जाता है, जिससे यह अपने पूरक क्वेंचिंग प्रोब से नहीं जुड़ता है और इस प्रकार एक फ्लोरोसेंट सिग्नल उत्पन्न होता है।

टचडाउन पीसीआर प्रोग्राम सेट होने के कारण, प्रोब और प्राइमर का अलग-अलग बंधन सुनिश्चित किया जा सकता है। जब एनीलिंग तापमान अधिक होता है, तो प्राइमर अपने उच्च Tm मान के कारण पहले टेम्पलेट से विशेष रूप से बंधता है, और फिर Taq एंजाइम की क्रिया के तहत प्रवर्धन करता है, जिससे प्रोब प्रवर्धन के लिए मूल टेम्पलेट की मात्रा बढ़ जाती है। एनीलिंग तापमान कम होने पर, प्रोब टेम्पलेट से बंधना शुरू कर देता है और फिर एक प्रतिदीप्ति संकेत उत्पन्न करता है।

चरण 3:

पैंगू qPCR परीक्षण चलाने के बाद, SNP विश्लेषण मेनू के अंतर्गत KASP डेटा प्राप्त करें।